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BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)
更新時(shí)間:2021-06-24   點(diǎn)擊次數(shù):1446次
  BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀的結(jié)構(gòu)一般可分五部分,即數(shù)據(jù)貯存和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)、流動(dòng)系統(tǒng)、激光系統(tǒng)、光學(xué)和電子系統(tǒng)。
  (1)數(shù)據(jù)貯存和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)
  數(shù)據(jù)貯存采用列表排隊(duì)方式。利用計(jì)算機(jī)用多種圖形來表明各參數(shù)間的相互關(guān)系,以單參數(shù)直方圖,雙參數(shù)二維點(diǎn)圖,等高圖等方式顯示。數(shù)據(jù)分析一般設(shè)定正確的分析范圍,劃分計(jì)算區(qū)域和計(jì)算結(jié)果。
 ?。?)流動(dòng)系統(tǒng)
  流動(dòng)系統(tǒng)是流式細(xì)胞儀的心臟,因?yàn)榧?xì)胞懸液在被檢測(cè)之前必須首先形成一個(gè)很細(xì)的穩(wěn)流,細(xì)胞在其內(nèi)部排成單列通過測(cè)量區(qū)。細(xì)胞懸液和鞘液分別(是分別還是同時(shí))進(jìn)入流動(dòng)室,鞘液的作用是使樣品懸液中的粒子組成單一縱列方式通過測(cè)量區(qū),保證每個(gè)細(xì)胞通過激光照射區(qū)的時(shí)間相等,從而得到準(zhǔn)確的細(xì)胞熒光信息。
 ?。?)激光系統(tǒng)
  多采用氬離子激光器。使發(fā)射光在可見光譜范圍內(nèi)488nm激發(fā)。目前市場(chǎng)上大多數(shù)熒光色素適用于此波長。激光的單色性好,功率高,穩(wěn)定。
  (4)光學(xué)和電子系統(tǒng)
  激光束射至經(jīng)流體力學(xué)聚焦的個(gè)別細(xì)胞和粒子后,光散射在各個(gè)方向(360°)發(fā)射。有兩個(gè)光散射參數(shù)需收集,前向角散射(FSC)主要用于檢測(cè)細(xì)胞體積的大小。另一為側(cè)向散射(SSC)用于檢測(cè)細(xì)胞膜,胞質(zhì),核膜等細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及胞質(zhì)內(nèi)顆粒。
  熒光信號(hào)是由對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色的特異性熒光染料受到激光激發(fā)后發(fā)射的。熒光波長與激光波長不同,而且強(qiáng)度較弱,因此要使用光學(xué)濾片濾除非熒光信號(hào)并使用靈敏的檢測(cè)器。熒光測(cè)量時(shí)通常使用線性放大器(即放大器的輸出與輸入是線性關(guān)系),適用于較小范圍內(nèi)變化的信號(hào),如前向角散射和DNA測(cè)量。但有時(shí)需要對(duì)數(shù)放大器(即輸出與輸入是對(duì)數(shù)關(guān)系)。如果原來輸出為1,當(dāng)輸入增加到原來的10倍時(shí),輸出是2。BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀在免疫學(xué)檢測(cè)中常使用對(duì)數(shù)放大器,因?yàn)樵诿庖邔W(xué)的樣品中,可能有的細(xì)胞未被染色而僅有自發(fā)熒光,為陰性群體;被染上色的細(xì)胞特異性熒光可能比自發(fā)熒光強(qiáng)數(shù)倍到數(shù)十倍,為陽性群體。使用對(duì)數(shù)放大器可以同時(shí)分辨出亮度差異大的多個(gè)細(xì)胞亞群,容易選定不同亞群間的分界點(diǎn),有利于流式細(xì)胞儀的分析和分選。
  熒光信號(hào)的補(bǔ)償:當(dāng)用一種激光束同時(shí)激發(fā)兩種染料發(fā)射出兩種不同波長的熒光時(shí),兩種熒光發(fā)射光譜有一定的重迭,可用電補(bǔ)償減去不適合熒光通道測(cè)定的重迭信號(hào)。
 ?。?)細(xì)胞分選系統(tǒng)
  細(xì)胞分選可使被特定的細(xì)胞從細(xì)胞群體中分離出來。流式細(xì)胞儀所測(cè)定的任何參數(shù)都可以作為細(xì)胞分選依據(jù),被選出來的細(xì)胞的均一性與所測(cè)參數(shù)有關(guān)。其工作原理是把液滴形成信號(hào)在壓電晶體上使之產(chǎn)生機(jī)械振動(dòng)(不太通順),液柱斷裂成一連串均勻的液滴,一部分液滴中包有細(xì)胞,如果其特性與被選定要進(jìn)行分選的細(xì)胞特性相符,則帶有特定的電荷。BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀帶有電荷的液滴向下落入偏轉(zhuǎn)板的高壓靜電場(chǎng)時(shí),偏轉(zhuǎn)落入特定的收集器內(nèi),完成細(xì)胞分類收集的目的。
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